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          北京實驗室 武漢實驗室 楊凌實驗室
          測序原理及流程圖
          2011/07/12, 瀏覽

          測序原理

          目前關于測序方法主要采用雙脫氧鏈終止法,雙脫氧鏈終止法又稱為Sanger法,其原理是DNA模板在DNA聚合酶、引物、四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)存在下進行復制時,在四管反應體系中分別按一定的比例引入四種雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基團,當ddNTP摻入鏈的末端時,該鏈就會停止延伸。如此每管反應體系中就產生了一系列長度不等的以ddNTP3端的DNA片段。反應終止后,分4個泳道進行凝膠電泳以分離長短不一的DNA片段,相鄰的片段長度相差一個堿基。經放射自顯影后,根據片段3’端的雙脫氧核苷,便可獲得合成片段的堿基排列順序。

          我公司目前采用Applied Biosystems 3730XL測序儀是高質量的長片段讀取和序列分析的測序平臺,應用靈活而廣泛。3730XL可同時分析96個樣品,該儀器采用4色熒光同時檢測,可不間斷24小時運行,自動灌膠,上樣,電泳分離,檢測及數據分析。

           

          測序流程圖

            

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