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          首頁 >> 產品服務 >> Oligo合成

          oligo合成原理

          2011/08/13, 瀏覽

          目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。公司采用的合成儀主要機型為全新的ABI公司的391合成儀和BioAutomation Corporation公司產的192道合成儀。

          亞磷酰胺三酯法合成DNA片段,具有高效、快速偶聯以及起始反應物比較穩定的特點。該方法是在固相載體上完成DNA鏈的合成的,合成的方向是沿待合成引物的3‘端向5‘端合成,相鄰的核苷酸通過3‘-5‘磷酸二酯鍵連接。

          1. 脫保護。在脫氧核糖的5`-OH在合成前是有DMT基團(二對甲氧三苯甲基)保護的,在合成的第一步需要將DMT保護基團從脫氧核糖上去掉,讓脫氧核糖的5`暴露出來才能連接新的堿基。

          2. 偶連。偶連是將新的堿基連接到已經暴露出來的脫氧核糖的5`-OH上。

          3. 帶帽(capping)反應。由于偶連的連接率不能達到100%,為了防止未連接上堿基的鏈繼續參與之后的偶連,需要將它暴露的脫氧核糖5`封閉。

          4. 氧化。氧在氧化劑碘的作用下,亞磷酰形式轉變為更穩定的磷酸三酯。

           經過以上四個步驟,一個脫氧核苷酸就被連接到固相載體的核苷酸上了。重復以上的步驟,直到所有要求合成的堿基被接上去。 之后通過氨解反應,將連在固相柱子上的引物洗脫下來,經過PAGE切膠法純化引物,成品引物通過C18濃縮、脫鹽,OD260定量測定之后,即可根據定單要求進行分裝。

           

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