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測序原理

目前關于測序方法主要采用雙脫氧鏈終止法，雙脫氧鏈終止法又稱為Sanger法，其原理是DNA模板在DNA聚合酶、引物、四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)存在下進行復制時，在四管反應體系中分別按一定的比例引入四種雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3’-OH基團，當ddNTP摻入鏈的末端時，該鏈就會停止延伸。如此每管反應體系中就產生了一系列長度不等的以ddNTP為3’端的DNA片段。反應終止后，分4個泳道進行凝膠電泳以分離長短不一的DNA片段，相鄰的片段長度相差一個堿基。經放射自顯影后，根據片段3’端的雙脫氧核苷，便可獲得合成片段的堿基排列順序。

我公司目前采用Applied Biosystems 3730XL測序儀是高質量的長片段讀取和序列分析的測序平臺，應用靈活而廣泛。3730XL可同時分析96個樣品，該儀器采用4色熒光同時檢測，可不間斷24小時運行，自動灌膠，上樣，電泳分離，檢測及數據分析。

 

測序流程圖